书城医学药理学实验方法
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第10章 药理学实验常用抗凝剂

常用抗凝剂大致分为三类。①化学药品:作用为消除钙离子作用,使血液中的钙转变为可溶性、非离子化的络合物,如拘橼酸钠、草酸盐和二乙胺四乙酸二钠等;②生物制剂:如肝素等,作用为阻止凝血酶的生成;③离子交换剂:采用物理性方法防止血液凝固。以下介绍几种常用的抗凝剂。

1.肝素(Heparin)

一种酸性黏多糖,常用其钠、钾、锂盐,易溶于水,不溶于多种有机溶剂。可经110℃高压消毒30min,4℃保存。肝素的作用是阻止凝血酶的生成,是常用的全身抗凝剂,纯肝素10mg可抗凝65~125ml血液。使用时一般配成10mg/ml肝素生理氯化钠溶液,用注射器吸取配好的肝素浸湿管壁,直接抽血于注射器内而使血液不凝。动物实验作全身抗凝时,一般剂量为:大鼠2.5~3m/200~300g,兔或猫10mg/kg,犬5~10mg/kg。

2.枸橼酸钠(Sodium Citrate)

溶于水,不溶于醇。可直接用本品粉末,血液加至3~5mg/ml,用于红细胞沉降率测定。按30mg/ml的枸橼酸钠溶液:血液=(1:9)比例混合即可使血液不凝固。现用的枸橼酸钠有两种:①枸橼酸三钠,有两种结晶水含量不同的成品,一种为2Na(下标3)C(下标6)H(下标5)O(下标7)·11H(下标2)O,与血浆成等渗浓度为3.8%;另一种为Na(下标3)c(下标6)H(下标5)O(下标9)·2H(下标2)O,与血浆成等渗浓度为3.2%(2.5%~4.0%),均为碱性,枸橼酸或其盐与钙作用生成可溶性络合物,当制成2.5%溶液时,pH为7.5。最低的抗凝浓度为0.2%,一般在血液中的最终浓度应为0.4%~0.6%。②枸橼酸二钠,属于酸性的枸橼酸。3.5%溶液的pH为4.5。

3.草酸钾(Potassium Oxalate)和草酸钠(Sodium Oxalate)

草酸盐均溶于水,微溶于醇,具有溶解度大,抗凝作用强的特点。体外抗凝时,血液用草酸钾l~2mg/ml,微量检验用血较少时.可配成20mg/ml溶液。草酸钠10mg可阻抗5ml血液凝固。烘烤温度若超过80℃,可使草酸钾分解为碳酸钾而失去抗凝作用。由于草酸盐类抗凝作用是与血液内的钙离子结合形成不溶性草酸钙而阻止血凝,故含钾、钠、钙的血样不能用其做抗凝剂。此外,草酸钾对乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶及淀粉酶也有抑制作用。

4.乙二胺四乙酸二钠(Disodium Ethylenediaminetetra-acetate,EDTA一2Na)

溶于水,微溶于醇。与钙结合比枸橼酸钠强10倍,是一种强力抗凝剂,其水溶液的pH约为5.3。体外抗凝用其1%的溶液。取EDTA-2Na 1g和NaCl 0.7g,加蒸馏水定容至100ml,过滤后即可。

5.三羟戊二酸钠(Sodium Trihyoxy Glutarate)

可替代枸橼酸钠,抗凝能力较弱。7%溶液的pH为4.3,抗凝力相当于2%~3.5%的枸橼酸盐溶液。本品不良反应较少,对红细胞基质能起到加强作用。

6.离子交换剂

可除去血液中的钙离子,产生抗凝,因不含抗凝物质,所以无中毒危险;但不能用于血液保存,多用于白细胞和血小板的分离,常用的离子交换剂有:①苯核磺酸(Dowex-50,苯乙烯),属于磺化芳香碳氢多聚物。每200~400ml血液使用25~30mg。②苯核磺酸(Permitite),属于磺化碳氢化合物,每200~400ml血液使用25~30g。③羧酸型(Amberlite IRC-50,丙烯酸),每200~400ml血液使用25~30g。