书城医学动物疫病实验室检验技术
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第63章 寄生虫标本的采集、保存和观察方法(2)

三、线虫的采集保存

1.采集在剖检家畜时,按上节寻找虫体的方法,发现虫体后,以弯头解剖针或毛笔将虫体挑出,移人生理盐水中,洗净;寄生于肺部的线虫和丝虫目的线虫,在略为洗净后即应尽快地放于固定液中固定,否则虫体易于破裂。

线虫雌雄异体,雌虫一般较雄虫大,在虫体鉴定时,常需依雄虫的某些形态特征作为依据,因此,采集虫体时不可忽视较小虫体的采集。一些有较大口囊的线虫(如圆线虫、夏伯特线虫、钩口线虫等)和有发达交合伞的线虫,其口囊或交合伞中,常包含有大量杂质,妨碍以后的观察,应在固定前用毛笔洗去,或充分振荡以洗去,尔后固定。

2.固定可采用酒精或福尔马林固定。用酒精固定时,系用70%酒精,加热到70℃左右(在火焰上加热时,酒精中有小气泡升起时即约为70℃),将洗净的虫体移入,虫体即在热固定液中伸直而固定,待酒精冷后,将虫体移入含5%甘油的80%酒精中,加标签保存。标签的书写内容与吸虫同。

福尔马林固定液是福尔马林3ml加到生理盐水l00ml中。固定虫体时也应先将固定液加热到70℃,再投入虫体。固定后标本即保存于固定液内,也可以移入含5%甘油的80%酒精中,加标签保存。

2.1线虫的观察与制片线虫经固定后,是不透明的,欲进行线虫形态的观察,必先进行透明或装片。为了能从不同的侧面对虫体形态进行观察,以不做固定装片为好,这样可以在载玻片上将虫体翻动,观察得更仔细。

2.2虫体的透明方法,常用的有以下各种。

2.1.1甘油透明法将保存于含5%甘油的80%酒精中的虫体,连同保存液倾入蒸发皿中,置温箱中,并不断滴加少量甘油,直到酒精蒸发殆尽,此时留于残存甘油中的虫体即已透明,可供检查。

如欲在短时间内完成这一透明过程,可将蒸发皿放于一加有热水的烧杯上,以酒精灯加热,促使蒸发皿中的酒精在短时间内挥发,而达到虫体透明的目的。

此法透明后的标本,即可保存于甘油内。

2.1.2乳酚(Lacto-pheno1)法乳酚系由甘油2份,乳酸1份,石炭酸1份和蒸馏水1份混合而成,是一种良好的透明液。虫体自保存液中取出后,应先移人乳酚液与水的等量混合液中,半小时后再移人乳酚液中,数分钟后,虫体即透明,可供检查。检查后虫体应自透明液中取出,移回原保存液中保存。

2.1.3石炭酸透明法虫体自保存液中取出,放于纯石炭酸溶液中(石炭酸原为针状结晶,纯溶液指含水10%的溶液),虫体很快即透明。若透明过度,可于检查时,在盖玻片边缘处(盖玻片下是浸在石炭酸中的虫体)滴加无水酒精一滴,此法透明快。透明液对人有腐蚀性,对虫体也有损害,故观察后应立即将虫体移回原保存液中,并在短期内更换保存液3次,以除去残留的石炭酸,否则虫体将变为棕褐色。

有时为了某种需要,亦可将线虫制成装片标本。制作时虫体不染色,直接循序通过70%,80%,90%,100%的酒精各0.5h脱水,最后在水杨酸甲酯或二甲苯中透明,透明后移载玻片上,滴加拿大树胶,拨正所需位置,加盖玻片封固。

如在虫体脱水前,按吸虫制片的方法,将虫体先以苏木素或卡红染色,尔后制成装片标本,则效果更好。

四、蠕虫卵的采集保存

为了教学与研究的需要,常需将蠕虫虫卵保存,留待以后的检查。

1.虫卵材料的采集

1.1自患畜粪便中收集虫卵可参照蠕虫卵的各种集卵法。自家畜粪便中收集虫卵的缺点。在于多数家畜体内常有多种寄生虫同时寄生,不易获得单一种的虫卵。

1.2生理盐水收集虫卵将解剖家畜时所采集的每种寄生虫挑入生理盐水中,此时虫体尚未死亡,常可在盐水中继续产出一部分虫卵,尔后将虫体取出,将此盐水静置沉淀,待虫卵集中于底部后收集之。

本法所得虫卵,因为未经肠道与粪便混合,所以是无色的,与粪便中所见虫卵,在颜色上有所不同,为此可将取得的虫卵混入粪便中,存放数天,使之染色。

2.虫卵标本的保存将虫卵保存于瓶内。将含有虫卵的沉淀倾入一小烧杯中,加入已加热到70~80℃的巴氏液,等冷后,保存于小口试剂瓶中,用时吸取沉淀,放于玻片上检查。巴氏液是用福尔马林30m1,氯化钠7.5g,水1000ml混合而成。在以上操作中,保存液的加热很为重要。否则有些虫卵在保存液中,仍然存活并继续发育或变形。虫卵保存福尔马林液中时间不宜太久,一般不超过5年,否则往往使卵壳损坏剥离影响虫卵鉴定。用下液固定,保存时间可得到延长。

福尔马林10ml,95%酒精30ml,甘油4ml,蒸馏水56ml。

第三节昆虫和蜱螨的采集、保存和观察方法

一、采集

采集这些标本,首先应了解这些采集对象的发育规律和生活习性。如有些昆虫常以较长的时间寄生于畜体的皮肤和体表,但另一些昆虫仅短时间地附着于畜体上吸血,这样其采集方法自应有所不同。

采集昆虫和蜱螨标本时,还必须记住昆虫和蜱螨都是雌雄异体的,尤其在蜱,雌雄虫体的差异极大,雌虫较雄虫要大得多,如不注意,则采集的结果,将均为大形的雌虫,而遗漏了雄虫,但雄虫却正是鉴定虫体时的主要依据,缺少雄虫将给鉴定带来困难。

1.畜禽体上昆虫和蜱、螨的采集

在畜禽体表,常有吸血虱、毛虱、虱蝇、蚤和蜱类寄生,在检查发现后用手或小镊子捏取,或将附有虫体的羽或毛剪下,置于培养皿中,再仔细收集。

寄生在畜体上的蜱类,常将假头深刺入皮肤,如不小心拔下,则可将其口器折断而留于皮肤中,致使标本既不完整,且留在皮下的假头还会引起局部炎症。拔取时应使虫体与皮肤垂直,慢慢地拔出假头,或以煤油、乙醚或氯仿,抹在蜱身上和被叮咬处,尔后拔取。

畜体上的蚤类,大多活动性较强,捕捉困难。可以用撒有樟脑(naphthalene)的布将畜体包裹,数分钟后,取下布来,则蚤即落于布内。也可用杀虫药喷洒畜体,待其死亡后采集。

畜体上螨的收集,可参考前一节螨病诊断中的病料采取方法。

蝇蚴的寄生阶段,多在家畜体内。除牛皮蝇寄生于畜体背部皮下时,可用手挤压而得到标本外,其它蝇蚴多需在家畜死后解剖时,在其寄生局部发现。

2.周围环境中昆虫和蜱螨的采集

2.1.双翅目吸血昆虫成虫的采集:在畜舍内,阴暗潮湿和空气不流通的场所,白天常有大量蚊类栖息,采集时可用一大口径试管扣捕。夜间可在畜体上用试管扣捕。吸血的蝇、虻、蚋可在畜舍内或动物体上用试管捕取,也可以用捕虫网在畜舍周围捕取。但捕虫网不应在家畜附近挥舞,以免造成家畜惊跑。

2.2畜舍地面和墙缝内昆虫和蜱螨的采集:在畜舍和运动场的疏松潮湿的土中,常可找到牛皮蝇、马胃蝇或羊狂蝇的成熟幼虫(应考虑其季节性)或蛹,可将其收集。如欲获得其成蝇,则应连同沙土收集于广口瓶中,罩以纱布,待其在瓶中羽化。在牛舍的墙边或墙缝中,可找到璃眼蜱。在鸡的窝巢内栖架上,可找到软蜱和刺皮螨。

2.3牧地上蜱的收集用白绒布旗一块,长45—100cm,宽25—l00cm,一边穿入木棍,在木棍两端系上长绳,以便拖曳。将此旗在草地上或灌木间拖动,草地或灌木上的蜱,即附着在旗面上,检查并收集于小瓶内。