第5章 地方病、寄生虫病预防与控制 (3)
③粪检查获血吸虫卵或毛蚴，或直肠活检无治疗史者发现血吸虫卵，有治疗史者发现活卵或近期变性虫卵。
④无血吸虫病治疗史或治疗3年以上的病人，环卵沉淀试验环沉率＞3％和（或）间接血凝试验滴度＞1∶10，酶标反应阳性，胶乳凝集试验滴度＞1∶10；未治或治后1年以上的病人血清血吸虫循环抗原阳性。
疑似病例：具备①与②项。确诊病例：疑似病例加③。临床诊断：疑似病例④。
（3）晚期血吸虫病
①长期或反复的疫水接触史，或有明确的血吸虫病治疗史。
②临床有门脉高压症状、体征，或有侏儒或结肠肉芽肿表现。
③粪检找到虫卵或毛蚴，或直肠活检无治疗史者发现血吸虫卵，有治疗史者发现活卵或近期变性虫卵。
④血清学诊断阳性。
疑似病例：具备①与②项。确认病例：疑似病例加③。临床诊断：疑似病例加④。
2.病原治疗
（1）个体化疗
①急性血吸虫病一般用吡喹酮总剂量120mg／kg（儿童140mg／kg）的6天疗法。
②慢性血吸虫病一般用吡喹酮40mg／kg一次顿服或1日2次分服。
③晚期血吸虫病一般可用吡喹酮总剂量60mg／kg，于1～2天内分3～6次服。
（2）群体化疗
①通过粪检抽样调查，以行政村为单位，凡血吸虫感染率高于20％的地区，不进行病原或血清学检查，对5～60岁当年有疫水接触史而无禁忌证的人群进行普治。普治用吡喹酮40mg／kg顿服或分2次服。
②对抽样调查感染率在20％以下的流行区，宜进行粪检或血清免疫反应检查，凡符合慢性血吸虫病或晚期血吸虫病者，给予吡喹酮40mg／kg治疗。
③渔民、船员、牧民及其他频繁接触疫水的人群，不做检查，按上述剂量每年治疗1次或2次。
④中、重度流行区的家畜（黄牛、水牛为主）每年化疗1次，宜与人群化疗同步进行。家畜化疗黄牛可用兽用吡喹酮30mg／kg顿服，水牛25mg／kg顿服，猪30mg／kg顿服。
⑤化疗时间，在流行区，人群化疗一般可在入冬感染季节结束以后进行，家畜化疗最好与人群化疗同步进行。
3.预防与控制
（1）查钉螺：春、秋两季是查灭钉螺的适宜季节，江南地区一般从3月中、下旬至4月下旬为最佳时期。查螺方法，在钉螺较多时，可采取系统抽样调查法，框距以5m或10m为宜。当钉螺密度下降时，宜采用系统抽样结合环境抽查法，框距以5m为宜。在复杂环境应采用全面细查法，湖荡洲滩则可采用棋盘式抽样调查法，有螺滩块采用50m×50m棋盘式落框查螺，无螺滩块采用20m×20m棋盘式落框查螺。
（2）灭螺
①对钉螺面积大的流行区，一般宜处理易感地带的钉螺孳生地，以化学灭螺药氯硝柳胺杀螺为主，每年1～2次。辅以必要的、尽可能结合生产的改变钉螺孳生环境的灭螺方法。
②对钉螺面积局限的流行区，以结合生产、水利改变环境为主，辅以药物杀灭。
（3）查治病：未控制区，可采用免疫学方法过筛，阳性者粪检，也可直接粪检。粪检宜在9～10月份进行，此时温度适宜，是1年中毛蚴孵出率最高的季节。粪检阳性者要及时治疗，仅免疫学阳性而粪检阴性者，可结合病史、症状及体征，给予扩大治疗。耕牛粪检以每年10～11月份进行较好，亦可先用免疫学方法过筛，阳性牛再粪检。粪检阳性牛以兽用吡喹酮在冬季治疗，仅免疫学阳性牛，可扩大化疗。
水网地区晚期血吸虫病病人较多，重点县（市）和重点乡（镇）要建立晚期病人固定治疗点，并定期复查。
（4）个人防护：在感染性钉螺密度高的地方，特别是江、湖、洲、滩地区，必须做好血吸虫病防护工作。防护方法根据当地情况酌定，包括用杀尾蚴剂杀灭水中尾蚴、改变耕作方式、或进行防护性灭螺，或用涂肤防蚴剂，以避免或减少人群接触疫水，杀灭或排出水中尾蚴，或阻止尾蚴入侵。如已接触疫水可进行早期治疗。
（5）安全用水：保护饮用水源，减少或避免人、畜粪便污染；挖井或兴建农村自来水；或用加热或药物杀死尾蚴后再使用，以减少或防止尾蚴入侵。
（6）粪管工作：大力提倡以户为单位的卫生厕所，建立无害化粪池、人粪预处理池式沼气或其他形式的发酵沉卵式粪池。尚未建造卫生厕所的，要教育居民不在河里洗刷马桶，渔民、船员不在河里大便，并迁移河边粪缸，以防虫卵进入河道。
（7）健康教育：采用疫区群众喜闻乐见的大众传播和人际传播形式，宣传消灭血吸虫病的重要性，宣传血吸虫病防治工作的长期性、经常性和科学性，广泛发动干部、群众积极参与血防工作。
4.常用操作
（1）改良加藤法：置尼龙绢片（80～100目／25.4mm）于受检粪样上，用软性塑料刮片在尼龙绢片上轻刮，粪便细渣露至绢片表面。定量板（3cm×4cm×2.5cm，板中圆孔孔径为3.5mm，孔中可容粪量41.7mg）放在载玻片中部，从尼龙绢片上刮取细粪渣填入定量板的中央孔中，填满刮平。轻轻提起定量板，粪样即留在载玻片上。取一张经甘油-孔雀绿溶液浸渍24小时以上的亲水性玻璃纸（30mm×30mm），盖在粪便上，用橡皮塞或另一块载玻片覆于玻璃纸上轻压，使粪便均匀铺开（20mm×25mm），编号。置于25℃室温，相对湿度75％下过夜，镜检。每份粪样需做3张涂片，以镜检检出的每张涂片虫卵数的平均值乘以24即1g粪便中的虫卵数（EPG）。注意：使用此法需掌握粪膜的合适厚度和透明的时间。如粪膜厚，透明时间短，虫卵难以发现；如透明时间过长，则虫卵变形，也不易辨认。
（2）尼龙绢集卵孵化法：取受检者粪样约30g，先置于40～60目／25.4mm的铜丝筛中，铜丝筛置于下口夹有铁夹的尼龙绢（260目／25.4mm）袋口上，淋水调浆，使粪液直接滤入尼龙绢袋中，然后移去铜丝筛，继续淋水冲洗袋内粪渣，并用竹筷在袋外轻轻刮动助滤，直到滤出液变清。取下夹于袋底下口的铁夹，将袋内沉渣淋入三角烧瓶。而后加做沉淀镜检，在烧瓶中吸取沉渣3～4滴放在载玻片上，抹成涂片，涂面约占载玻片面积的2／3。涂片的亮度以能透过涂片尚能看清印刷字体为标准，将涂片置于低倍显微镜下检查。全片镜检时间不少于2分钟，每份粪便检查三张涂片。镜检时应仔细识别血吸虫虫卵和其他蠕虫卵。然后将盛有粪便沉渣的三角烧瓶加水至离瓶口1cm处，放入孵化室（箱）或在室温下孵化。
一定时间后取出烧瓶，观察毛蚴。一般需观察2～3次，观察时间随温度高低而不同。温度高时毛蚴孵出较早；温度低时毛蚴孵出较迟。气温超过30℃时，第1次观察可在0.5～1小时后进行，阴性者可在4小时后观察第2次，8小时后观察第3次，3次均为阴性时，判为阴性结果；气温在26～30℃时，可在孵化后4小时开始观察，阴性者8小时及12小时再观察1次，气温在20～25℃时，则可在8小时后观察第1次，12小时后观察第2次；如利用自然气温孵化，一昼夜之间的气温悬殊，可在操作后的次晨再观察1次；一般室温在25℃以上时，可利用自然气温孵化，无需加温。注意：观察毛蚴时，应将烧瓶向着光源，并衬以黑色背景。要注意毛蚴与水中原生动物的区别。如有怀疑，可用毛细吸管吸出，在显微镜下鉴别。
（3）快速诊断试纸条法（DDIA）
①使用方法。轻轻颠倒混匀标记液，确保沉淀全被混悬，加50μl标记液至PVC小杯中，再加10μl等检血清，混匀1分钟，取试纸条插入小杯中。注意应将吸水垫较短的一端插入杯底。
②结果判断。阳性反应：检测带和对照带都出现紫蓝色带。阴性反应：对照带出现紫蓝色带而检测带无紫蓝色带。注意检测血清必须新鲜，否则会影响检测结果。取试纸条时，用手捏住吸水垫（较长的一端），严禁触摸检测膜；试纸条一定要插入杯底；检测带反应过强时，对照带显色会减弱甚至不显色，此结果仍以阳性论；该试纸条与肺吸虫病人和肝吸虫病人血清有部分交叉反应，检测时应加注意。
（4）环卵沉淀试验（COPT）
①常用方法。虫卵：热处理超声干燥虫卵粉。以重感染兔血清（接种尾蚴1500～2000条，42天的兔血清）测试环沉率＞30％为合格。操作方法：先用熔化的石蜡在洁净的载玻片两端分别画2条相距20mm的蜡线，在蜡线之间加受检者血清2滴（0.05～0.10ml），然后用针头挑取干卵100～150个，加入血清中，混匀覆以24mm×24mm盖玻片，四周用石蜡密封后，置于37℃温箱中，经48～72小时后用低倍（80～100×）显微镜观察反应结果，疑似者应在高倍（400×）显微镜下加以识别。为简化操作亦可选用预制干卵PVC膜片，只需加入血清，置湿盒中37℃保温经24小时取出，倾去血清，加少量盐水显微镜下观察反应。
反应标准：典型的阳性反应为泡状、指状或细长卷曲的带状沉淀物，边缘较整齐，有明显的折光。其中泡状沉淀物须大于10μm（约相当于2个红细胞大小），才能定为阳性。阳性反应的标本片，应观察100个成熟虫卵，计算其沉淀率；阴性者必须看完全片。
阴性反应：虫卵周围光滑，无沉淀物；或有小于10μm的泡状沉淀物。
阳性反应的强度和环沉率：“＋”虫卵周围出现泡状、指状沉淀物的面积小于虫卵面积的1／4；细长卷曲的带状沉淀物小于虫卵的长径。“＋”虫卵周围出现泡状、指状沉淀物的面积大于虫卵面积的1／4；细长卷曲的带状沉淀物相当于或超过虫卵的长径。“＋”虫卵周围出现泡状、指状沉淀物的面积大于虫卵面积的1／2；细长卷曲的带状沉淀物相当于或超过虫卵长径的2倍。
②双面胶纸条法。虫卵：热处理超声干燥虫卵粉。以25mg／ml的重感染兔血清γ－球蛋白为标准血清，测试环沉率＞30％为合格。
操作方法：取国产打有双圆孔的双面胶纸（厚度约150μm，圆孔直径16mm孔，间距8mm），先将其一面的覆盖纸揭去，然后粘贴于载玻片上，胶纸条须与玻片紧密粘牢，不能留有空隙。然后再揭去胶纸条上面的覆盖纸，用适宜的滴管滴加2滴约50μl血清于圆孔中，覆以盖玻片（22mm×22mm）后，置37℃孵箱中，48～72小时后，观察结果。
反应标准：同常用方法。
（5）间接红细胞凝集试验（IHA）
①常用方法。抗原为用葡聚糖凝胶G100初步纯化的可溶性血吸虫卵抗原致敏的绵羊红细胞。所用绵羊红细胞先经2.5％戊二醛醛化及1∶5000鞣酸溶液鞣化后再行致敏。致敏后的红细胞以含10％蔗糖及1％正常兔血清的pH 7.2PBS配5％悬液，分装安瓿低压冻干封存。每批致敏红细胞作效价测定，滴度达1∶1 280～2 560为合格。
操作方法：启开安瓿，每支以1ml蒸馏水稀释混匀备用。用微量滴管加4滴（0.025ml／滴）生理盐水于U型微量血凝反应板第1排第2孔内，第3孔空白，第4孔加1滴。第1孔内储存待检血清，并从中吸取血清1滴加入第2孔内，充分混匀后，吸出2滴于第23孔和第4孔各加1滴。在第4孔混匀后弃去1滴使第3孔、第4孔血清稀释度分别为1∶5，1∶10。用定量吸管吸取致敏红细胞悬液，于第3孔和第4孔内各加1滴，立即旋转震摇2分钟，室温下静置1小时左右，观察结果。每次试验均应有阳性血清及生理盐水作阳性和阴性对照。
结果判断：阴性反应为红细胞全部沉入孔底，肉眼见一边缘光滑，致密的小圆点。阳性反应。“＋”红细胞形成薄层凝集，边缘呈现不规则的皱褶。“＋”红细胞形成薄层凝集，充满整个孔底。“＋”红细胞形成薄层凝集，面积较“＋”者小。“＋”红细胞大部分沉积于孔底，形成一圆点，周围有少量凝集的红细胞，肉眼见周边模糊（或中间出现较为明显的空白点）。
反应标准：以血清1∶10稀释出现阳性反应可判为血吸虫病患者。
②二氨酚致敏法。抗原为日本血吸虫虫卵可溶性抗原（SEA）及成虫尿素溶解性抗原（AUA）混合而成，其比例为SEA10mg／L＋AUA20mg／L。所用绵羊或人“O”型红细胞经5％戊二醛醛化后，用二氨酚法致敏。致敏后的红细胞中加入含10％蔗糖及1％正常兔血清的pH7.2 PBS，分装后冻干保存。每批致敏红细胞以阳性参考血清作效价测定滴度达1∶640～１∶1 280，阴性血清及盐水对照不出现凝集者为合格。