冻精解冻操作应在帐篷或室内进行，不允许在露天或圈地上操作。要经常保持帐篷内的卫生，操作时严禁吸烟、生火炉等，防止烟、尘污染或危害精液。工作人员要清洗、消毒双手，穿清洁的工作服。
解冻需两人协作，一人加温解冻液，另一人从液氮罐中取冻精。取一支或数支经灭菌的玻璃试管或盛过青霉素的小瓶，按发情配种母牦牛头数计量注入解冻液，按2毫升／头的比例。再将加解冻液后的试管或小瓶，浸入事先准备好的盛有开水的烧杯或瓷杯内加温，开水不得淹过试管或小瓶口。用温度计测量试管内稀释液温度至38℃～40℃时，立即用竹夹子或在液氮罐口先预冷数分钟后的金属无钩镊子，取出所需的冻精颗粒，投入到解冻液中，摇动数秒钟使其迅速解冻，然后快速进行活力检查，精子活力在0.3以上即可用于输精。