（2）多特异性抗球蛋白试剂（IgG+C3d）。
4．仪器：Baso血库专用离心机、显微镜。
5．操作步骤。
（1）取试管3支，分别标明Ac、Bc、Oc，对应加入50ul5%A、B、O型标准红细胞生理盐水悬液，然后各加入100ul患儿血清。
（2）将加好的试管置37℃水浴箱孵育30min致敏。
（3）将孵育好的试管用生理盐水洗涤3次，最后1次历尽管口水滴，各管加入1滴多特异性抗球蛋白试剂（IgG+C3d）后以3400r/min1000g离心15～30s。按下表分析结果。
6．临床意义。A型患儿血清中检出抗A，B型患儿血清中检出抗B，或检出ABO以外的抗体，都是新生儿溶血病的重要依据（见表12-9）。
1．原理。被IgG型抗体包被或致敏的患儿红细胞通过热释放试验将不规则抗体释放于放散液中，然后通过抗人球蛋白实验检测放散液中IgG型抗体。
2．标本：患儿抗凝静脉血3.0ml。
3．试剂。
（1）生理盐水。
（2）5%A、B、O型标准红细胞生理盐水悬液。
（3）多特异性抗球蛋白试剂（IgG+C3）。
4．仪器：Baso血库专用离心机、显微镜。
5．操作步骤。
（1）患儿红细胞用生理盐水洗涤4～6次，提取尽可能多的压积红细胞，加等量生理盐水，混匀。
（2）将试管放在56℃水浴箱中10min，开始1min不断振荡试管，中间可再振荡1次，立即以2000r/min离心2～3min，吸取全部上清液（即放散液）备用。
（3）取试管3支，分别标明Ac、Bc、Oc，对应加入50μl5%A、B、O型标准红细胞生理盐水悬液，然后将提取的放散液平均分配到3管中。
（4）将加好的试管置37℃水浴箱孵育30min致敏。
（5）将孵育好的试管用生理盐水洗涤3次，最后1次历尽管口水滴，各管加入1滴多特异性抗球蛋白试剂（IgG+C3）后以3400r/min1000g离心15～30s。按上表分析结果。
6．注意事项及临床意义（见表12-10）。
（1）红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性。
（2）婴儿为O型，直抗为阴性或母亲和婴儿ABO血型相同，不做放散实验。
（3）直抗≤1+，做热放散实验。
（4）直抗≥1+，做乙醚放散实验。
（5）做热放散注意保温，冬天可将离心用的转筒一起放入56℃水浴箱浴温后一起离心。
（十七）母婴Rh血型不合新生儿溶血病检测标准操作规程
由于母婴Rh血型不合，母体产生相应的IgG类Rh抗体，经过胎盘进入胎儿体内，与胎儿红细胞发生特异性的抗原抗体反应，从而破坏胎儿红细胞并引起一系列的临床症状。
运用直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验可检测出婴儿体内是否有来自母体的与婴儿相对应的IgG类Rh抗体。
方法一直接抗球蛋白试验（同ABO血型不合新生儿溶血病直接抗球蛋白试验），Rh系统溶血病直接抗人球蛋白实验一般≥1+方法二游离抗体试验1．原理：新生儿血清中IgG抗体来自母亲，如果在新生儿血清中发现有与其红细胞不配合的IgG抗体时，应将其血清与标准的谱细胞反应加以证实。
2．标本：患儿不抗凝静脉血3.0ml。
3．试剂。
（1）多特异性抗球蛋白试剂（IgG+C3d）。
（2）5%谱细胞（国产）。
4．仪器：Baso血库专用离心机、显微镜。
5．操作步骤。
（1）取试管10支，分别标明1、2、3……10，对应加入1~10号谱细胞生理盐水悬液1滴，然后各加入2滴患儿血清。
（2）将加好的试管置37℃水浴箱孵育30min致敏。
（3）将孵育好的试管用生理盐水洗涤3次，最后1次历尽管口水滴，各管加入1滴多特异性抗球蛋白试剂（IgG+C3d）后以3400r/min1000g离心15～30s。查谱细胞格局表分析结果。
方法三患儿红细胞抗体乙醚释放试验1．原理：被IgG型抗体包被或致敏的患儿红细胞通过乙醚释放试验将不规则抗体释放于放散液中，然后运用抗人球蛋白实验检测放散液中IgG型抗体。
2．标本：患儿抗凝静脉血3.0ml。
3．试剂。
（1）多特异性抗球蛋白试剂（IgG+C3d）。
（2）5%谱细胞悬液。
（3）0.9%生理盐水。
4．仪器：Baso血库专用离心机、显微镜。
5．操作步骤。
（1）患儿红细胞用生理盐水洗涤6次，提取尽可能多的压积红细胞于试管中，加等量生理盐水和双份乙醚，盖紧瓶塞，置振荡器振荡2～3min使红细胞全部破坏。
（2）以3000r/min离心5min，离心后分为三层，取下层深红色层液体（放散液）转移入另一试管中。
（3）将试管置于56℃水浴箱中振荡1～2min，然后将试管置于37℃水浴箱中孵育10～15min，让乙醚充分挥发。
（4）再次以3000r/min离心2～3min提取放散液。
（5）取试管10支，分别标明1、2、3……10，对应加入1～10号谱细胞生理盐水悬液1滴，然后将提取的放散液平均分配到10管中。
（6）将加好的试管置37℃水浴箱孵育30min致敏。
（7）将孵育好的试管用生理盐水洗涤3次，最后1次历尽管口水滴，各管加入1滴多特异性抗球蛋白试剂（IgG+C3d）后以3400r/min离心15～30s观察结果。
（8）对照谱细胞反应格局表以确定特异性抗体。
6．注意事项。
（1）标本采集后应立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗体从细胞中丢失。抗球蛋白血清应按说明书使用最适稀释度，否则可产生前带和后带反应而误为阴性结果。
（3）待检红细胞一定要用盐水洗涤4～6次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白，以防止假阴性结果。
（4）全凝集、冷凝集血液标本或脐血标本Wharton胶，若洗涤不充分，血液标本中会有很多网织红细胞，另外，若抗球蛋白血清中含有抗转铁蛋白时，都可使红细胞产生凝集。
（5）如母婴存在Rh血型不合的同时，也存在ABO血型不合，则应在释放、游离试验中加入相应的ABO细胞排除ABO-HDN，此时加放的A、B细胞必须加以选择，必须不含有能与母亲血清中Rh抗体反应的抗原。例如：当母亲血清中含有抗-D，则必须选择Rh阴性A型及Rh阴性B型细胞分别与婴儿红细胞放散液和血清反应。按ABO溶血病的判断标准判断是否存在ABO溶血病。
（6）Rh溶血病的游离试验要求最好用母亲的血清代替婴儿血清做一组谱细胞。由于婴儿体内的所有血型抗体都来自母亲，而且抗体效价一般比婴儿血清中抗体更高，血清量也更多，可以得到更清楚地结果。然而该试验阳性不能证实新生儿溶血病，因为该试验检出的抗体可能是由于母亲以前经输血或孕产留下的。该试验只能确定婴儿血清中可能存在的血清抗体。确诊Rh新生儿溶血病还需参考直抗和释放试验的结果。
二、输血科仪器使用标准操作规程
（一）BASO微电脑控制离心机操作规程
1．日常操作程序。
（1）打开离心机电源开关。
（2）按“OPEN”键，同时按手动安全门扣，打开离心机上盖。
（3）放入要离心的试管（注意试管的三点配平），关上离心机上盖。
（4）按说明书中所述选择所需的工况。
（5）按“START”键开始离心。
（6）听到“嘟”的长音，表示离心结束，可以打开上盖取出试管，全部离心实验做完后，关闭离心机电源。
（7）如果修改转速和时间，请按其操作手册说明进行。
2．注意事项。
（1）第一次使用离心机前请详细阅读离心机使用说明书。
（2）离心机应安装在平稳的工作台面上，离心机运行过程中请不要移动。
（3）严禁使用电源稳压器。
（4）严禁在离心机上盖上放置杂物。
（5）严禁单一试管进行离心。当试管或样品数量较少的时候，要依据三点平衡的原理放置（不够数量请添加配平用试管），即最少要3支试管平衡放置后才可以进行离心实验。
（6）严禁开盖离心；离心机运行过程中，严禁添加和放置物品，保证运转安全。
（7）停电无法正常打开上盖时，可用细木杆（牙签）插入离心机右侧小孔并用力推，同时按手动安全门扣，即可打开上盖取出离心试管；严禁在离心机运行过程中强行打开上盖。
（8）离心机运行过程中出现不正常的振动或噪声，请立刻停止运转，关闭电源进行检查；在故障排除后方可进行离心实验。
3．维修保养。
（1）操作前后的检查。
①检查内部有无杂质水滴，并清除杂质及水滴。
②检查转盘是否松动，如果松动请锁紧后再使用。
③检查门盖是否可盖紧，并检查螺丝是否松动，如不正常，应暂时使用并通知当地经销商。
④检查接地线是否正常连接。
⑤检查灯信号及开关是否运作正常。
（2）每日应检查项目：清理机内的污迹，检查转盘是否有刮伤、变形或腐蚀，如有上述情形请联络当地经销商作进一步检查。
（3）每年应检查之项目：检查转盘固定螺帽是否松动，若发现转速表的数值无法符合实际转速，请联络工程师检查。
（4）清洗：当样品弄脏时，请用少量清洁剂擦拭，并用干布擦干。消毒转盘时，温度不要超过100℃（不得长时间加温）。
（5）可能出现的问题：工作不正常时，请参阅其操作手册处理或请维修人员。
（二）戴安娜卡式离心机操作规程
1．日常操作程序。
（1）打开离心机电源开关。
（2）按“OPEN”键，同时按手动安全门扣，打开离心机上盖。
（3）放入要离心的血型卡或抗人球卡（二点配平），关上离心机上盖。
（4）按说明书中所述选择所需的工况。
（5）按“START”键开始离心。
（6）听到“嘟”的长音，表示离心结束，可以打开上盖取出血型卡或抗人球卡，全部离心实验做完后，关闭离心机电源。
2．注意事项。
（1）第一次使用离心机前请详细阅读离心机使用说明书。
（2）离心机应安装在平稳的工作台面上，离心机运行过程中请不要移动。
（3）严禁使用电源稳压器。
（4）严禁在离心机上盖上放置杂物。
（5）严禁单一血型卡进行离心。
（6）严禁开盖离心；离心机运行过程中，严禁添加和放置物品，保证运转安全。
（7）停电无法正常打开上盖时，可用离心机后部紧急备用开关开启。
（8）离心机运行过程中出现不正常的振动或噪声，请立刻停止运转，关闭电源进行检查；在故障排除后方可进行离心实验。
3．维修保养。
（1）操作前后的检查。
①检查内部有无杂质水滴，并清除杂质及水滴。
②检查转盘是否松动，如果松动请锁紧后再使用。
③检查门盖是否可盖紧，并检查螺丝是否松动，如不正常，应暂时使用并通知当地经销商。
④检查接地线是否正常连接。
⑤检查灯信号及开关是否运作正常。
（2）每日应检查项目。清理机内的污迹，检查转盘是否有刮伤、变形或腐蚀，如有上述情形请联络当地经销商作进一步检查。
（3）每年应检查之项目：检查转盘固定螺帽是否松动，若发现转速表的数值无法符合实际转速，请联络工程师检查。
4．清洗：当样品弄脏时，请用少量清洁剂擦拭，并用干布擦干。消毒转盘时，温度不要超过100℃（不得长时间加温）。
5．可能出现的问题：工作不正常时，请维修人员进行维修。
（三）冰冻血浆解冻箱操作规程
1．操作方法。
（1）连接好进水管、排水管，并接通电源。
（2）拧开水龙头，打开电源开关，进入工作状态。
（3）按“进水方式”键，选取择“自动进水”方式。
（4）按“启动”键开始进水，直至进水完成，“预温”灯亮。
（5）选择所需的解冻温度及解冻时间。
（6）待预温完成后，将冰冻血浆装入解冻专用夹后放入解冻槽中。
（7）按“启动”开始解冻冰冻血浆。
2．注意事项。
（1）独立使用三芯插座（I≥15A）。
（2）务必连接好进水管、排水管及黄绿接地线。
（3）必须在非解冻状态下按“清洗”键对解冻箱进行定期清洗（建议1次/周）。
（4）发现有破损血浆请立即换水，并进行清洗。
（5）建议每天换水一次，以保证良好的水循环。
（6）长期不工作时，应将解冻箱内的水排尽。
（7）避免标签等杂物落入水箱内，以免造成水管堵塞，致使循环系统瘫痪。
3．保养与维修。
（1）清洗：仪器经销商据检验科的自来水质建议清洗频率。具体方法是：非解冻状态下，按动“左右”键使“清洗”反显再按“确定”键，机器进入清洗状态。此时应接好进水管和出水管，仪器清洗过程如下，先排加热箱中的水，再注入清水，开始循环，然后排空水，清洗完成时，仪器自动返回初始状态。
注意事项：按“取消”键可中止清洗。建议具有自动进水条件的单位应经常使用该功能。
（2）温度校正：用户应定期对水箱温度进行检测校正。时间一般每半年一次。具体方法为：a.在关机状态下，按住面板上的“上下”档键开机，循环泵随即打开，加热箱内的水上升至解冻槽内，温度窗口显示即时温度。b.用量程准确的0～50℃分辩率为0.1℃的水银温度计测量解冻槽内的水温，经观察若显示温度与测量温度不一致，可按温度“+、-”键若干次直至两者温度相同。c.最后按一次“确定”键确认即完成校正。
（四）戴安娜专用孵育器操作规程
1．操作。
（1）打开电源。
（2）机器预温到37℃。
（3）将加入标本的戴安娜抗人球卡放入孵育槽内。
（4）将定时旋钮调至15～20min。
（5）待定时器报警时，取出待检卡。
2．维护保养。
（1）保持机外清洁，经常注意温度变动。
（2）每周用消毒液清洗孵育槽。
（3）节假日不用时及时切断电源。
（康琼英武志云）