原种接种就是将母种接入原种培养基的过程。原种接种必须在超净工作台或接种箱内进行。每支母种可扩接4～6瓶原种。待料温冷却到30℃以下时，把灭菌后的原种培养基、优质母种和接种工具同时置于接种箱或工作台，经消毒后按照无菌操作要求，先将试管母种的棉塞拔去，管口在酒精灯火焰上灼烧一圈，用接种铲在母种试管内将菌丝和培养基横割成10～12块黄豆大小的菌种块，再取原种瓶子，拔去棉塞，略倾斜菌种瓶，选取培养基中部靠瓶壁处作为接种点，用接种铲铲取一块母种放进接种点，菌丝一面紧贴培养料，随即将棉塞在酒精灯火焰上过火后塞进瓶口即可（如图12）。每培养瓶选取两个相对位置作为接种点。
图12原种接种示意图
在接好种的原种瓶的正面贴上标签，写明菌种编号、接种日期，在每个原种瓶的棉塞部分包上牛皮纸或报纸，随后把原种置培养箱（室）中，在24℃～28℃下黑暗培养。每天检查有无杂菌感染及菌丝生长情况，发现有杂菌感染及长势不良的瓶了要及时拣出清除，经15～20天菌丝长满瓶。