温度对白灵菇生长发育影响最大，白灵菇是一种低温结实性菌类，菌丝生长与子实体生长所需要的温度不同。简单地讲，是菌丝生长需要温度较高，子实体发生、发育需要的温度较低。菌丝生长的温度范围为3℃～32℃，适宜温度为25℃～28℃，在35℃～37℃时菌丝停止生长，20℃以下生长速度减慢，5℃时菌丝基本停止生长。白灵菇在子实体发生时需要低温刺激，以0℃～10℃最好。
子实体生长发育温度为10℃～18℃，以12℃～15℃最为适宜，但在8℃~13℃的气温下，子实体生长慢，但质地细腻，品质好。白灵菇对高温极其敏感，长期处于20℃以上，多数品种不会形成原基，已形成的原基也不能正常生长，已生长出来的子实体也很容易变褐腐烂。这是白灵菇生物学特性的又一个主要特点。
菌丝生长最适温度为25℃～28℃，25℃下菌丝经30~65天可达到生理成熟，在35℃～36℃菌丝停止生长。菇蕾适宜分化温度为0℃～13℃，子实体发育温度为15℃~18℃，从出菇到采收需7～12天。