书城医学动物疫病实验室检验技术
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第15章 常用试剂的配制(2)

例:欲配制10%葡萄糖溶液500ml,需用50%葡萄糖溶液多少毫升?

需用50%葡萄糖液=500×10%/50%=500×10/50=100ml

交叉法则:

1.由已知浓度的溶液稀释成所需浓度的溶液:把所需的浓度放在两条直线的交叉点,已知浓度写在左上端,左下端写上蒸馏水的浓度0,然后把每一条线上的两个数字相减,将其差数写在该直线的另一端,如此右上端和右下端的数字,便分别表示出制备此溶液时,需用已知浓度的溶液和蒸馏水之份数。例如:

现有95%酒精,怎样配成75%酒精?

95%75ml

75%

O%20ml

即需将95%酒精75ml加水20ml,混合即成75%洒精95ml。

2.由两种已知浓度的溶液欲配制介于两者之间的所需浓度的溶液,可按下法进行:把所需浓度放在两条直线交叉点,已知高浓度的写在左上端,低浓度的写在左下端,然后把每一条直线上的两个数字相减,将其差数写在该直线的另一端。如此右上端和右下端的数字便分别制备所需浓度的溶液时,需用每一浓度溶液的份数。

例如,由5%及50%两种葡萄糖溶液怎样配制10%葡萄糖溶液?

5%40ml

此即表示用50%葡萄糖溶液5ml和5%葡萄糖液40ml混合,即可配成10%葡萄糖溶液45ml。

五、不同单位浓度溶液换算方法

当量浓度与摩尔浓度的换算:

1.当量浓度=摩尔浓度×化合价

如1当量硫酸溶液相当于多少摩尔浓度?

代入上式:摩尔浓度=l/2=0.5

2.当量浓度=克分子浓度×化合价

如0.66mol/L。磷酸溶液相当于多少当量浓度?

代入上式:当量浓度=0.667×3≈2

如化合价为1价,则当量浓度即等于摩尔浓度。

百分浓度(W/V)与当量浓度及摩尔浓度的换算:

2.1当量浓度=百分浓度×1000/摩尔/化合价

即,当量浓度=百分浓度×1000×化合价/摩尔

如22%(W/V)硫酸钠溶液相当于几个当量浓度?

代入上式:当量浓度=22/100×1000×2/142=22×10×2/142=3.1

2.2摩尔浓度=百分浓度×1000/摩尔

如22%(W/V)硫酸钠溶液相当于几个当量浓度?

代入上式:摩尔浓度=22/100×1000/142=22×10/142=1.55(mol/L)

当量浓度及摩尔浓度与百分浓度(W/V)的换算:

百分浓度=摩尔数×当量浓度/1000×化合价

如3.1mol/L硫酸钠溶液相当于百分浓度(W/V)多少?

代入上式:百分浓度=142×3.1/1000×2=22%

百分浓度=摩尔数×摩尔浓度/1000

如1.55mol/L硫酸钠溶液相当于百分浓度(W/V)多少?

代入上式:百分浓度=142×1.55/1000=22%

容量分析中当量浓度与溶液体积之间的基本计算:当两种溶液互相反应达到终点时,它们的克当量数或毫克当量数应恰巧相等,可以下式表示之:

NV=NlVl

N为第一种溶液的当量浓度,V为第一种溶液的体积;N1为第二种溶液的当量浓度,V1为第二种溶液的体积。

例如,以1.250mol/L盐酸溶液滴定20ml氢氧化钠溶液,滴定恰到终点时,用去盐酸溶液18.94ml,则氢氧化钠溶液的当量浓度是多少?

代入上式:12.50×18.94=x×20x=1.250×18.94/20=1.184moi/L。

即该氢氧化钠溶液的当量浓度是1.184mol/L。

六、常用缓冲液的配制

1.甘氨酸-盐酸缓冲液(0.05mol/L)

X毫升0.2mol/L甘氨酸+Y毫升0.2mol/L HCI,再加水稀释至200毫升

甘氨酸分子量=75.07,0.2mol/L甘氨酸溶液含15.01g/L。

2.邻苯二甲酸–盐酸缓冲液(0.05mol/L)

X毫升0.2mol/L邻苯二甲酸氢钾+Y毫升0.2mol/L HCl,再加水稀释到20毫升

邻苯二甲酸氢钾分子量=204.23,0.2mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85g/L

3.磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液

Na2HPO4分子量=14.98,0.2mol/L溶液为28.40g/L。

Na2HPO4·2H2O分子量=178.05,0.2mol/L溶液含35.01g/L。

C4H2O7·H2O分子量=210.14,0.1mol/L溶液为21.01g/L。

4.柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液

5.柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(0.1mol/L)

柠檬酸C6H8O7·H2O:分子量210.14,0.1mol/L溶液为21.01g/L。

柠檬酸钠Na3C6H5O7·2H2O:分子量294.12,0.1mol/L溶液为29.41g/ml。

6.乙酸-乙酸钠缓冲液(0.2mol/L)

7.磷酸盐缓冲液

7.1磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液(0.2)

Na2HPO4·2H2O分子量=178.05,0.2mol/L溶液为85.61g/L。

Na2HPO4·12H2O分子量=358.22,0.2mol/L溶液为71.64g/L。

Na2HPO4·2H2O分子量=156.03,0.2mol/L溶液为31.21g/L。

7.2磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液(1/15mol/L)

Na2HPO4·2H2O分子量=178.05,1/15mol/L溶液为11.876g/L。

KH2PO4分子量=136.09,1/15mol/L溶液为9.078g/L。

8.磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液(0.05mol/L)

X毫升0.2mol/L KH2PO4+Y毫升0.2mol/L NaOH 加水稀释至20毫升

9.巴比妥钠-盐酸缓冲液(18℃)

巴比妥钠盐分子量=206.18;0.04mol/L溶液为8.25g/L

10.Tris-HCl缓冲液(0.05mol/L)

50毫升0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与X毫升0.1mol/L盐酸混匀后,加水稀释至100毫升。

三羟甲基氨基甲烷分子量=121.14;

0.1mol/L溶液为12.114g/L。Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳,使用时注意将瓶盖严。

11.硼酸-硼砂缓冲液(0.2mol/L硼酸根)

硼砂Na2B4O7·H2O,分子量=381.43;0.05mol/L溶液(=0.2mol/L硼酸根)含19.07g/L。

硼酸H2BO3,分子量=61.84,0.2mol/L溶液为12.37g/L。

硼砂易失去结晶水,必须在带塞的瓶中保存。

12.甘氨酸-氢氧化钠缓冲液(0.05mol/L)

X毫升0.2mol/L甘氨酸+Y毫升0.2mol/LNaOH加水稀释至200毫升

甘氨酸分子量=75.07;0.2M溶液含15.01克/升。

13.硼砂-氢氧化钠缓冲液(0.05mol/ml硼酸根)

X毫升0.05mol/L硼砂+Y毫升0.2mol/LNaOH加水稀释至200毫升

硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=381.43;0.05M溶液为19.07克/升。

14.碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.1mol/L)

Ca2+、Mg2+存在时不得使用

Na2CO2·10H2O分子量=286.2;0.1mol/L溶液为28.62g/L。

N2HCO3分子量=84.0;0.1mol/L溶液为8.40g/L。

15.“PBS”缓冲液

第三节组织培养试剂配制

一、抗生素贮存液

1.青霉素G(钠盐):配制成10000IU/ml,使用时使最终浓度为100IU/ml,即100ml培养液(或维持液)内加lml。

配制方法:用无菌去离子水(或双蒸水)溶解青霉素;分装后在-20℃冰冻保存。

2.链霉素(硫酸盐):配制成10000ug/ml,使用时最终浓度为100ug/ml,即lOOml培养液(或维持液)内加入lml。制备的方法步骤同青霉素G。

3.庆大霉素:注射用硫酸庆大霉素80000IU×5,灭菌双蒸水70ml,混合后成为5000IU/ml,小瓶分装保存于4℃,使用时按总量的1%加入试液中。

4.制霉菌素(Nystatin):这类抗生素几乎不溶于水,故配制成5000IU/ml的悬液,使用时最终浓度为25IU/ml,即每ml培养液(或维持液)内加0.5ml。

配制方法:用无菌去离子水悬混抗生素;分装后置-20℃冰冻保存。

5.氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml:溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

6.羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml):溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

7.甲氧西林(methicillin)(100mg/ml):溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

8.卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml):溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

9.氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml):溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

10.四环素(tetracyyline)(10mg/ml):溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

11.萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml):溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

二、1%酚红溶液

酚红1.0

Lmol/L NaOH 7.0ml

配制方法:酚红在乳钵内加少量lmol/LNaOH,研磨使其完全溶解,NaOH加得越少越好;加去离子水至lOOml;高压消毒,在室温或4℃贮存。

三、NaHC03溶液

浓度1.4%4.4%5.6%

NaHC0314.0g 44.0g 56.0g

去离子水1000ml 1000ml 1000ml

配制方法:将NaHCO3溶解在去离子水中;加压过滤除菌;用密闭小瓶分装,4℃贮存,每瓶最好一次用完。

四、1mol/L NaOH液

NaOH 40.0g

去离子水1000ml

配制方法:将NaOH溶解于去离子水中;高压消毒,注意不能用橡胶或铅制瓶塞;在室温或4℃贮存,堵紧瓶塞避免CO2进入,新鲜配制为好;配制0.1mol/L NaOH时,将lmol/L NaOH用去离子水稀释10倍。

五、Hank‘S溶液

10倍Hank’s母液的制备:

A液:NaCl 80.0g

KCl 4.0g

CaCl21.4g

MgS04·7H2O 2.0g

去离子水450ml

B液:Na2HP040.6g

KH2P040.6g

葡萄糖10.0g

去离子水450ml

C液:1%酚红16ml

配制方法:依次在去离子水中溶解上述成分;将B液慢慢地加到A液中,同时不断搅拌;然后加入C液;加去离子水到1000ml;加压过滤除菌(或0.053MPa高压蒸气消毒25~30min);4℃贮存;应用前每1000ml使用液中加1.4%NaHCO3溶液25ml。

六、Earle‘s液

10倍Earle’s母液的制备:

A液:NaCl 68.0g

KCl 4.0g

MgS04·7H202.0g

NaH2P041.25g

葡萄糖10.Og

去离子水800ml

B液:CaCl22.0g

去离子水150ml

C液:1%酚红16ml

配制方法:依次在去离子水中溶解上述成分;将B液慢慢加到A液中,同时不断搅拌,然后加入C液(酚红);加去离子水到1000ml;加压过滤除菌(或0.053MPa高压蒸气消毒25~30min);4℃贮存;应用前每1000ml使用液中加4.4%NaHCO3溶液25ml。

七、磷酸盐缓冲盐溶液(PBS):使用液(pH7.3)

A液:NaCl 8.Og

KCl 0.2g

Na2HP041.15g

KH2P040.2g

去离子水1000ml

B液:CaCl20.lg

MgCl2·6H200.lg

去离子水200ml

配制方法:按上述次序将盐类在去离子水中溶解;A和B液分别高压灭菌;冷却后A液和B液混合(注意无菌操作);分装,室温或4℃贮存。